導讀
為(wei)了(le)保(bao)障人們的(de)(de)食品(pin)安全，農業農村(cun)部(bu) 發布了(le)《GB 31658.20-2022 食品(pin)安全國家標準 動物(wu)性食品(pin)中酰胺(an)醇類藥物(wu)及其代謝物(wu)殘留量的(de)(de)測定 液相色譜(pu)-串(chuan)聯質譜(pu)法》，該標準自2023年2月1日開始已正式(shi)實施(shi)。然而小(xiao)編在走訪客戶時(shi)，發現(xian)不少(shao)實驗室在分析(xi)該類化(hua)合物(wu)的(de)(de)時(shi)候，不約而同出(chu)現(xian)了(le)以下問(wen)題(ti)：
主管，這個實驗我做外標法線性非常好，內標法線性除了氯霉素都不太好呢？
加入的內標物也是混標吧，按理說不會是每種物質的體積加入有偏差呀？
恩，是加的混標，我試過好幾遍了，結果每次都是這樣。
是不是有剛好那三個物質的保留時間有干擾物質？
也不是，我試過另外一對離子對，還更換過色譜柱和梯度，也是同樣現象。
那內標響應有什么規律么？
這個還真有，隨著目標物濃度的不斷提高，內標物的響應也是不斷增大。
這倒是個有趣的現象，咱們把這個問題努力攻克一下！
酰胺醇類藥物
酰胺醇類藥物又稱氯霉素類抗生素，屬于廣譜抗生素，常見的該類藥物主要包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。農業農村部公告第250號已明確將氯霉素列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》。甲砜霉素為氯霉素類衍生物，而氟苯尼考是新一代氯霉素類抗生素，氟苯尼考胺是其主要代謝產物。根據《GB 31658.20-2022》，除氯霉素的內標選擇是氯霉素-D5外，其它3種均是采用的都是其-D3的內標物。
表1. 常見(jian)酰胺醇類(lei)藥(yao)物
酰胺醇類分析難點
從以上化學式可以看到，該類物質都含有一個或兩個氯元素，而氯元素非常顯著的特點則是有Cl35和Cl37的同位素。
我們以氟苯尼考為例，上圖和下圖分別為氟苯尼考標樣和氟苯尼考D3內標(biao)的質譜圖，可(ke)以(yi)看到，氟(fu)苯尼(ni)考(kao)除了(le)在m/z 356和m/z 358處有較高響(xiang)(xiang)應(ying)(ying)外，在m/z 359處也有一定響(xiang)(xiang)應(ying)(ying)，而m/z 359正是(shi)氟(fu)苯尼(ni)考(kao)-D3的母離子(zi)。那么，氟(fu)苯尼(ni)考(kao)在m/z 359的響(xiang)(xiang)應(ying)(ying)是(shi)否會對(dui)內標(biao)物氟(fu)苯尼(ni)考(kao)-D3的響(xiang)(xiang)應(ying)(ying)造(zao)成干擾，從而導致(zhi)了(le)這一問(wen)題的產生？
為(wei)此，我們設計了一個小實驗。只進標(biao)(biao)樣(yang)溶液（不含內(nei)(nei)標(biao)(biao)），我們看到(dao)其在內(nei)(nei)標(biao)(biao)通(tong)道(dao)也(ye)是(shi)(shi)有響應的(de)(de)，以(yi)下是(shi)(shi)10 ng/mL氟苯(ben)尼考(kao)的(de)(de)色(se)譜圖，氟苯(ben)尼考(kao)在定量通(tong)道(dao)上的(de)(de)峰(feng)面(mian)積是(shi)(shi)3457270，而在內(nei)(nei)標(biao)(biao)通(tong)道(dao)上的(de)(de)峰(feng)面(mian)積達到(dao)296836，占比8.6%。這樣(yang)也(ye)就不難理(li)解(jie)隨著目標(biao)(biao)物濃度的(de)(de)不斷(duan)提高，內(nei)(nei)標(biao)(biao)的(de)(de)響應也(ye)會隨之增(zeng)大(da)了，這樣(yang)的(de)(de)情(qing)況(kuang)下，內(nei)(nei)標(biao)(biao)法得到(dao)的(de)(de)線性曲線當然(ran)不佳了。
島津解決方案
如(ru)何解決這些含氯化(hua)合(he)物(wu)-D3同位(wei)素內標因目標組分帶來(lai)的(de)(de)響應干(gan)(gan)擾(rao)問題？比較簡單的(de)(de)方法是避開受到干(gan)(gan)擾(rao)的(de)(de)離(li)(li)(li)子而選(xuan)(xuan)擇其它離(li)(li)(li)子作(zuo)為(wei)母離(li)(li)(li)子，如(ru)氟(fu)苯尼考-D3，選(xuan)(xuan)擇m/z 361作(zuo)為(wei)母離(li)(li)(li)子，因為(wei)氟(fu)苯尼考對(dui)m/z 361離(li)(li)(li)子的(de)(de)貢獻更(geng)小。下表為(wei)化(hua)合(he)物(wu)新選(xuan)(xuan)擇的(de)(de)離(li)(li)(li)子對(dui)信息。
表2. 酰胺(an)醇類藥物內標推(tui)薦(jian)離(li)子(zi)對信(xin)息
改(gai)變成(cheng)新的(de)離子對信(xin)息后，甲砜霉(mei)素、氟(fu)(fu)苯尼(ni)考(kao)和氟(fu)(fu)苯尼(ni)考(kao)胺(an)的(de)線性改(gai)善非常明顯，這(zhe)樣內(nei)標法的(de)線性不(bu)佳(jia)問(wen)題就妥妥的(de)解決啦！
總結
看了本期的難點項目經驗分享，相信大家都有所了解，如果分析的化合物中含有氯或溴元素時，可要小心了，經常可能出現因為內標離子通道選擇的不合適，造成目標物的同位素峰與內標物的質量數發生重疊的問題，從而影響到線性乃至定量有偏差。因此在分析這類化合物時，尤其是化學式中含有不止一個氯或溴元素的物質時，建議大家可以盡量購買含氘代、13C或15N個數比較多的同位素內標，另一方面，當化合物在內標的通道有干擾時，我們也可以選擇[M-H+2]-作為內標的母離子而不是基峰[M-H]-。
島津應用云后續還將發布獸藥分析大講堂(tang)系列，根據獸藥檢(jian)測技術的難(nan)點項目，陸續發布檢(jian)測關鍵點小(xiao)貼(tie)士(shi)及解決方案，幫(bang)助大家共克(ke)食品安全(quan)難(nan)關。
撰稿人：駱丹
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