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更高效的前處理技術以實現目標物的富集和基質/雜質的清除；
更優越的分離手段，得到更純、更集中流出的色譜峰以提高目標物的瞬間濃度；
更的檢測技術以提高目標物(wu)信(xin)號響應。

　　目(mu)前(qian)質(zhi)譜(pu)(pu)(pu)儀(yi)因其通用(yong)性(xing)高、選(xuan)擇性(xing)好和靈敏(min)(min)度高，是主流的(de)檢(jian)測(ce)技術(shu)，其中(zhong)，靈敏(min)(min)度是評價質(zhi)譜(pu)(pu)(pu)等(deng)級(ji)的(de)重要指標之(zhi)一。質(zhi)譜(pu)(pu)(pu)儀(yi)的(de)靈敏(min)(min)度受多方(fang)面影響(xiang)，其中(zhong)可(ke)以通過(guo)降低進(jin)入離子源(yuan)的(de)液流，有效提(ti)高離子化效率，從而(er)較大提(ti)高質(zhi)譜(pu)(pu)(pu)檢(jian)測(ce)靈敏(min)(min)度。如目(mu)前(qian)比(bi)(bi)較常見(jian)的(de)Nano液相、Micro液相和Semi-micro常規分析型液相，我(wo)們來做一下性(xing)能對比(bi)(bi)。

三種液相系統的性能對比

　　Nano液相(xiang)(xiang)的(de)(de)(de)液量有(you)利于(yu)(yu)LCMSMS離(li)(li)子(zi)(zi)源的(de)(de)(de)去(qu)(qu)溶劑化，從(cong)而(er)提(ti)高(gao)(gao)質譜(pu)響應。但(dan)是(shi)(shi)由(you)于(yu)(yu)液流過(guo)低，其(qi)通量較(jiao)小；另(ling)外，納(na)升(sheng)級的(de)(de)(de)流速(su)對(dui)(dui)輸液泵(beng)的(de)(de)(de)精度(du)和脈沖控制要求(qiu)非常(chang)(chang)(chang)高(gao)(gao)，再加上(shang)其(qi)精密的(de)(de)(de)部件對(dui)(dui)使用(yong)和維(wei)護(hu)都(dou)有(you)很高(gao)(gao)的(de)(de)(de)要求(qiu)。故(gu)現(xian)有(you)技術(shu)下(xia)Nano液相(xiang)(xiang)的(de)(de)(de)通量和穩定(ding)性(xing)(xing)無法達到(dao)常(chang)(chang)(chang)規分析(xi)型液相(xiang)(xiang)的(de)(de)(de)水平(ping)。而(er)Semi-micro常(chang)(chang)(chang)規型液相(xiang)(xiang)已成為相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)成熟、應用(yong)范圍相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)廣(guang)的(de)(de)(de)分析(xi)手段，這兩項指(zhi)標非常(chang)(chang)(chang)優異，但(dan)是(shi)(shi)，由(you)于(yu)(yu)較(jiao)大(da)的(de)(de)(de)液流，導致進入離(li)(li)子(zi)(zi)源，尤其(qi)是(shi)(shi)ESI離(li)(li)子(zi)(zi)源之(zhi)(zhi)后，其(qi)去(qu)(qu)溶劑化效率較(jiao)差，靈敏(min)度(du)無法進一步提(ti)高(gao)(gao)。 Micro液相(xiang)(xiang)的(de)(de)(de)色譜(pu)柱內徑介于(yu)(yu)0.1~1.0 mm之(zhi)(zhi)間，流速(su)一般介于(yu)(yu)1~100 μL之(zhi)(zhi)間，流速(su)下(xia)的(de)(de)(de)儀器穩定(ding)性(xing)(xing)、耐用(yong)性(xing)(xing)和維(wei)護(hu)性(xing)(xing)都(dou)比(bi)Nano液相(xiang)(xiang)有(you)大(da)幅提(ti)高(gao)(gao)，通量接近半微(wei)量分析(xi)型液相(xiang)(xiang)，而(er)其(qi)去(qu)(qu)離(li)(li)子(zi)(zi)效率相(xiang)(xiang)比(bi)半微(wei)量分析(xi)型液相(xiang)(xiang)大(da)大(da)提(ti)高(gao)(gao)。因此Micro液相(xiang)(xiang)沒有(you)明顯的(de)(de)(de)短板，理(li)論上(shang)是(shi)(shi)三種液相(xiang)(xiang)中相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)理(li)想的(de)(de)(de)技術(shu)。

島津微流量液相質譜聯用系統 Mikros-LC+LCMS-8060

　　在本研究(jiu)中(zhong)研究(jiu)人(ren)員報道(dao)了(le)(le)尿(niao)苷及其(qi)衍生物在低(di)溫及高有機溶劑的(de)條件下容易析出造成(cheng)信號變動，指出了(le)(le)利用HILIC等(deng)親(qin)水原(yuan)理的(de)核(he)苷酸LCMS分析中(zhong)需要注意的(de)問題。利用島津微流量(liang)液相(xiang)質譜(pu)聯用系統測試了(le)(le)總(zong)tRNA組分中(zhong)24個核(he)苷標樣，確定了(le)(le)各(ge)個標樣所用的(de)母離子和子離子，以及在HILIC色譜(pu)柱中(zhong)的(de)保留(liu)時(shi)(shi)間。通過多反應監(jian)測及保留(liu)時(shi)(shi)間，可以區分這些修飾核(he)苷及其(qi)同分異構體(ti)。

核苷標樣微流量液質系統色譜圖

測定了24個修飾核苷標樣的小檢出量，運用微流液相色譜—三重四極桿質譜聯用儀檢出下限為0.1-1 fmol，而一般用于鑒定修飾核苷所用的半微流液相色譜—三重四極桿質譜聯用儀的檢出下限為1-10 fmol。
運用上述建立(li)的(de)方法，對細(xi)長聚(ju)球藻 PCC 7942中的(de)修飾核苷進行定量檢測，僅(jin)需含25 ng總(zong)tRNA組(zu)分(fen)的(de)樣品，即可得(de)到清(qing)晰(xi)的(de)質譜(pu)結(jie)果(guo)，而在傳統的(de)半微流液(ye)相(xiang)色譜(pu)—三重(zhong)四極桿質譜(pu)聯用儀上得(de)到相(xiang)同結(jie)果(guo)，至(zhi)少需要含100 ng的(de)總(zong)tRNA組(zu)分(fen)的(de)樣品[6, 7]。

細長聚球藻樣品圖

　　海南大學(xue)林桓副研(yan)究員(yuan)：修飾核(he)苷中尿嘧啶核(he)苷及其衍生物電離困難及各修飾核(he)苷同分(fen)異(yi)構體之(zhi)間不易區分(fen)的(de)(de)特點一直是質譜(pu)(pu)(pu)檢測的(de)(de)難點。同時常規的(de)(de)半微流(liu)液相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)—三重(zhong)四極(ji)桿質譜(pu)(pu)(pu)聯(lian)用(yong)(yong)儀檢出限較(jiao)高，需(xu)要的(de)(de)樣品(pin)量較(jiao)大，這也是不易提(ti)(ti)取(qu)的(de)(de)樣品(pin)檢測的(de)(de)制約條件之(zhi)一。該(gai)研(yan)究依托島津(jin)公司強大的(de)(de)質譜(pu)(pu)(pu)分(fen)析平臺(tai)，使用(yong)(yong)微流(liu)液相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)—三重(zhong)四極(ji)桿質譜(pu)(pu)(pu)聯(lian)用(yong)(yong)儀分(fen)離鑒定(ding)總tRNA組分(fen)中的(de)(de)修飾核(he)苷，靈敏度較(jiao)半微流(liu)液相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)——三重(zhong)四極(ji)桿質譜(pu)(pu)(pu)聯(lian)用(yong)(yong)儀提(ti)(ti)高了(le)10倍以上。該(gai)方法(fa)可支(zhi)持表(biao)觀轉錄(lu)組學(xue)的(de)(de)發展。